Mariana A. Murdjeva1*, Emilia T. Milieva2, Rumen S. Stefanov3, Marian M. Draganov4, Petko B. Krastev5
1Department of Microbiology & Immunology, 2Department of Physics, Biophysics & Mathematics, Faculty of Pharmacy, 3Department of Social Medicine and Public Health, Faculty of Public Health, 4Department of Biology, Faculty of Medicine, Medical University, Plovdiv, Bulgaria, 5Institute for Nuclear Research and Nuclear Energy, Bulgarian
Academy of Sciences, Sofi a, Bulgaria
AIM: The aim of this study was to introduce a micromeritic procedure (a statistical approach for small objects) in indirect immunofl uorescence assay (IFA) to fi nd objective quantitative parameters of antinuclear antibody (ANA) patterns which could support a diagnosis of auto-immune diseases. MATERIALS AND METHODS: Sera of patients with systemic autoimmune diseases, McCoy-Plovdiv serum-free cell line, goat anti-human immunoglobulin-G FITC-conjugate, fl uorescent microscope, computer-assisted digital image processing, analysis using a micromeritic procedure, ANOVA. RESULTS: Three ANA fl uorescent patterns (homogeneous, rim and speckled) were analyzed by the micromeritic procedure. Parameters for the image brightness of the pixels (pixel grey value) were obtained and discussed as objective characteristics of fl uorescent patterns: maximum ANA-linkage volume and surface density were established for the objects with speckled localization pattern. CONCLUSION: The micromeritic method for getting objective quantitative values of ANA fl uorescent patterns in indirect immunofl uorescent assay might be a valuable tool aiding in immunological diagnosing if integrated in a laboratory software package.
ЦЕЛЬ: Работа ставит себе целью ввести микрометрическую процедуру (статистический анализ, применяемый для небольших объектов) в индиректный флюоресцентный анализ в целях получения объективных количественных параметров при анализе локализации антинуклеарных антител в диагностике аутоиммунных заболеваний. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ: Применены: сыворотки пациентов с системными аутоиммунными заболяваниями; безсывороточная клеточная линия McCoy-Plovdiv; маркированный флюорохромом FITC иммуноглобулин; флюоресцентный микроскоп; цифровизирование и обработка изображений; микрометрический анализ; ANOVA статистическая обработка данных. РЕЗУЛЬТАТЫ: Три вида локализации антиген-антитела (ANA) реакции - гомогенная, периферическая и петнистая - анализированы микрометрическим методом. Считается, что яркость пикселов флюоресцентных изображений служит объективной характеристикой вида локализации. Максимальный объем и поверхностная плотность связанных с субстратом ANA получены для петнистого типа локализации. ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Mикрометрический метод количественной характеристики типа ANA локализации в индиректной иммунофлюоресценции может оказаться ценным дополнительным инструментом для анализа в иммунологических диагностических лабораториях с возможностью для включения в пакет программного обепечения (software) компьютерной программы для обработки изображений.